SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)（非還原）技術(shù)手冊

1. 產(chǎn)品概述

SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液 (5×, Non-Reducing Protein Loading Buffer) 是一種經(jīng)過高度濃縮的常規(guī)蛋白電泳專用預(yù)混液。與還原型上樣液不同，本產(chǎn)品不含 DTT 或 

ββ

-巰基乙醇等還原劑，專門用于在電泳過程中保持蛋白質(zhì)分子內(nèi)部及分子間的二硫鍵處于完整狀態(tài)。

本產(chǎn)品包含高純度的 SDS、甘油、溴酚藍(lán)及 Tris-HCl 緩沖體系。5 倍濃縮的設(shè)計(jì)允許實(shí)驗(yàn)室在上樣時(shí)加入更小體積的緩沖液，從而增加蛋白質(zhì)樣品的實(shí)際加樣量。本產(chǎn)品廣泛用于研究蛋白質(zhì)的天然亞基構(gòu)成、二硫鍵錯(cuò)配以及抗體整體結(jié)構(gòu)的鑒定。

2. 作用機(jī)理

非還原型上樣緩沖液通過以下機(jī)制實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離與示蹤：

• 變性而不還原： 組分中的 SDS 與熱處理協(xié)同作用，破壞蛋白質(zhì)的氫鍵及疏水鍵，使蛋白質(zhì)變性并帶上等密度的負(fù)電荷。由于不含還原劑，二硫鍵 (S-S) 不會(huì)被打開，多聚體或含有二硫鍵結(jié)合的復(fù)合體將以整體形式遷移。

• 增加密度： 甘油 能夠顯著增加樣品的比重，確保樣品在加樣后沉降至凝膠加樣孔底部，避免樣品擴(kuò)散至電泳緩沖液中。

• 實(shí)時(shí)示蹤： 溴酚藍(lán) 作為指示前沿，在電泳過程中提供清晰的藍(lán)色條帶，便于實(shí)驗(yàn)人員實(shí)時(shí)監(jiān)測電泳進(jìn)度。

• 維持 pH 穩(wěn)態(tài)： Tris-HCl 緩沖系統(tǒng)確保樣品在加熱及電泳初期的 pH 環(huán)境與濃縮膠一致，從而提升條帶的銳利度。

3. 產(chǎn)品核心優(yōu)勢

• 二硫鍵保護(hù)： 精確配方確保在變性條件下不破壞蛋白質(zhì)的共價(jià)二硫鍵，是分析蛋白質(zhì)折疊、多聚化及抗體結(jié)構(gòu)的“金標(biāo)準(zhǔn)"。

• 高濃縮倍數(shù)： 5× 濃縮液最大限度減少了上樣緩沖液占用的體積，提升了低濃度樣本的檢出靈敏度。

• 條帶清晰銳利： 采用電泳級(jí)超純原料，有效消除條帶拖尾、擴(kuò)散或背景雜色現(xiàn)象。

• 上樣指示明確： 選用高品質(zhì)溴酚藍(lán)，顏色明亮，在凝膠中遷移一致，不產(chǎn)生干擾條帶。

• 穩(wěn)定性： 經(jīng)過優(yōu)化的化學(xué)穩(wěn)定性測試，在室溫或 4°C 下短時(shí)間存放依然保持性能穩(wěn)定。

4. 廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域

• 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析： 檢測目標(biāo)蛋白是否存在二硫鍵交聯(lián)的多聚體或二聚體。

• 抗體藥物研究： 鑒定單克隆抗體（IgG）的完整性及其重鏈/輕鏈的連接狀態(tài)（非還原條件下 IgG 呈現(xiàn)約 150 kDa 的單一條帶）。

• 蛋白復(fù)合體研究： 考察在變性條件下仍依賴二硫鍵維持的復(fù)合體穩(wěn)定性。

• Western Blot 預(yù)處理： 用于非還原型 Western Blot 實(shí)驗(yàn)，檢測對(duì)構(gòu)象依賴性較強(qiáng)的抗原表位。

5. 技術(shù)參數(shù)規(guī)格 (Specifications)

6. 使用方法

1. 混合： 按 1:4 的比例將本產(chǎn)品加入到蛋白質(zhì)樣本中（例如：40 μL 樣本加入 10 μL 上樣緩沖液）。

2. 加熱： 混勻后，于 95°C - 100°C 加熱 5-10 分鐘以充分使蛋白變性。

3. 離心： 冷卻至室溫后，微速離心數(shù)秒，收集冷凝水。

4. 上樣： 直接取樣進(jìn)行 SDS-PAGE 電泳。

7. SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)（非還原）質(zhì)量承諾

我們對(duì)每一批次的非還原型上樣緩沖液均進(jìn)行嚴(yán)格的 pH 值校驗(yàn)及電泳條帶分辨率測試（以標(biāo)準(zhǔn) IgG 作為對(duì)照）。我們承諾：本產(chǎn)品不含還原組分，能確保蛋白質(zhì)二硫鍵的絕對(duì)完整。如有任何技術(shù)疑問，我們的團(tuán)隊(duì)將竭誠為您服務(wù)。